章逸 邊銀丙 《食用菌學報》 2008年第03期
摘要:概述了食用菌病毒病的種類、危害特征、檢測技術及防治措施等方面的研究現(xiàn)狀,提出了食用菌病毒病研究中存在的問題,并展望了食用菌病毒病研究的發(fā)展趨勢。
關鍵詞:食用菌;A病毒病;A檢測;A防治
S646A
病毒病是食用菌生產中較重要的一類病害。病毒病害與細菌、真菌、線蟲病害危害不同,其發(fā)病癥狀具有潛隱特性,直到生產中的某個時期才開始顯癥,因此是危害食用菌生產較為嚴重的一類病害。隨著研究技術的不斷進步,研究水平的不斷提高,已在雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)、香菇(Lentinula edodes)、糙皮側耳(Pleurotus ostreatus)、刺芹側耳(Pleurotus eryngii)、草菇(Volvariella volvacea)、茯苓(Wolfiporia cocos)、銀耳(Tremella fuciformis)和金針菇(Flammulina velutipes)等食用菌中檢測到病毒或類似病毒顆粒(Virus Like Particles,VLPs),并獲得了部分食用菌病毒或VLPs的基因組序列[1~36] 。
1 食用菌病毒病及其危害
1.1λ孢蘑菇病毒病
1950年,美國賓夕法尼亞州La France兄弟在雙孢蘑菇菇房中發(fā)現(xiàn)了“La France disease”,后稱為“Die-back disease”,這是最早報道的食用菌病毒病害,發(fā)病雙孢蘑菇菌柄細長、菌蓋薄、生長停滯、產量顯著下降[1, 37]。隨后,英國、荷蘭等國家相繼發(fā)現(xiàn)了該病害,發(fā)病癥狀雖因栽培地區(qū)、栽培條件、病毒侵染時期不同而有所不同,但總體表現(xiàn)為子實體畸形、變色和產量顯著下降[2, 3]。目前,“La France disease”在全世界范圍內均有發(fā)生,給雙孢蘑菇生產造成了嚴重的影響[4]。“La France disease”的病原很復雜,在不同感病雙孢蘑菇中曾檢測到至少6種病毒或VLPs,而其作用機制目前仍不是很清楚,但可以肯定,其中至少有一種病毒及其dsRNA(Double-stranded RNAs)與癥狀有明顯的相關性[5~7]。通常認為,與典型的“La France Disease”相關的病毒是34~36 nm的等軸狀病毒顆粒(La France Isometric Virus, LIV)。LIV的 dsRNA至少有6條,最多時可以檢測到9條,按片段長度大小可分為大(L1: 3.6 kbp; L2: 3.0 kbp; L3: 2.8 kbp; L4: 2.7 kbp; L5: 2.5 kbp)、中(M1: 1.6 kbp; M2: 1.4 kbp)和小(S1: 0.9 kbp; S2: 0.8 kbp)三類,其中M1、S1和S2在感病雙孢蘑菇中很少檢測到。目前,已測定了L1、L3、M1、M2的全長基因組序列和L5的大部分基因組序列,5個序列中只有L1由核苷酸推測的氨基酸序列與數(shù)據(jù)庫中依賴于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp)序列相似[7~11]。該等軸狀病毒顆粒(至少6條dsRNA)可以通過菌絲接合或感病孢子傳播傳染[2, 3, 5, 6]。在感病雙孢蘑菇中發(fā)現(xiàn)的另一種與“La France Disease”相關的病毒是19×50 nm的細菌狀病毒顆粒(Mushroom Bacilliform Virus, MBV)。MBV是+ssRNA(single stranded RNA)單分體基因組病毒,是Barnaviridae科中Barnavirus屬的唯一成員。目前已獲得其全長基因組序列,長度為4 kbp,包括4個開放閱讀框架(open reading frames, ORFs),分別編碼20 KDa、73 KDa、47 KDa和22 KDa的多肽。序列分析表明,其ORFs組成和由核苷酸序列推測的氨基酸序列與黃癥病毒組( Luteoviruses)的亞組Ⅱ和南方菜豆花病毒組(Sobemoviruses)相似[12]。Revill等也分析了MBV基因組結構特征及其表達機制[13, 14]。
1996年,在英國發(fā)現(xiàn)了雙孢蘑菇的另一種病害“patch disease”,其發(fā)病癥狀表現(xiàn)為產生無菇區(qū)、出菇期推遲、白色品種子實體褐變、提前開傘、子實體畸形等中的一種或幾種,導致雙孢蘑菇質量和產量下降。Gaze等發(fā)現(xiàn)了與“patch disease”相關的一些新的dsRNA,推測其可能是一種新的病毒,并將此病毒命名為Mushroom virus X(MVX)[15, 16]?，F(xiàn)在,“patch disease”在歐洲一些國家均有發(fā)生[18]。MVX dsRNAs多達26條(0.64 kbp ~ 20.2 kbp),有23條dsRNAs與癥狀相關,其中4條小的dsRNAs(2.0 kbp,1.48 kbp,0.8 kbp,0.6 kbp)與菌蓋褐變有關,另有3條dsRNAs(16.2kbp,9.4 kbp,2.4 kbp)在健康的樣品中也能檢測到。目前,已測定了部分dsRNAs的基因組序列。dsRNAs的種類及濃度或豐度因樣品不同變化很大。根據(jù)MVX dsRNA的數(shù)量、大小和圖譜分析,認為MVX可能是多種病毒的復合體。此外,在投射電鏡下沒有發(fā)現(xiàn)這些dsRNAs有外殼蛋白包被[17, 18]。
1.2ο愎講《靜
香菇帶毒是香菇栽培中的常見問題,香菇感染病毒后的癥狀主要表現(xiàn)為菌絲生長緩慢、長勢減弱、子實體畸形、質量和產量降低等[19~23]。國內外的研究人員先后從生長不正常的香菇子實體和菌絲體中分離到了包括球狀、桿狀和蝌蚪狀(噬菌體)的病毒顆?；騐LPs[19, 22, 23]。日本的Ushiyama(1977)在生長不正常的香菇子實體中檢測到直徑分別為25 nm、30 nm和39 nm(主要類型)的球狀病毒顆粒,以及長度可達1500 nm易彎曲的長線狀和大小為280~300 nm×25~28 nm 的桿狀VLPs[19]。我國的沈學仁等(1992)從生長不正常的香菇菌絲體中也分離到一種直徑為34 nm、CP分子量為22 kDa、基因組為+ssRNA的球狀病毒顆粒,電鏡下觀察發(fā)現(xiàn),病毒顆粒表面光滑無外膜,常呈晶格排列[22]。梁振普等(2005)在香菇中發(fā)現(xiàn)了直徑約為30 nm的球狀病毒和頭部直徑約為40 nm的噬菌體兩種病毒顆粒[23]。
1.3Σ嘍病毒病
我國的學者(1990)在美味側耳(P. sapidus)、糙皮側耳、漏斗狀側耳(P. sojor-caju)、佛羅里達側耳(P.florida)等側耳屬食用菌中發(fā)現(xiàn)病毒病害[24, 25]。美味側耳中的病毒顆粒可分為球狀(φ19、φ25、φ32 nm)和桿狀(40~600 nm× 12~14 nm)兩種,基因組主要由4條dsRNA組成;糙皮側耳、漏斗狀側耳和佛羅里達側耳中的病毒粒子為等軸對稱病毒,直徑在23 nm左右[24]。通過對感染病毒的糙皮側耳子實體進行超微結構分析發(fā)現(xiàn),病毒主要分布于子實體層和柄細胞的細胞質或泡囊內,在細胞間的分布不均勻,且能通過隔膜孔器進行細胞間易位[25]。
韓國近幾年也相繼報道了糙皮側耳[26~29]和刺芹側耳病毒病害[30]。糙皮側耳病毒病害癥狀因病原不同而表現(xiàn)為子實體畸形或不顯癥,但產量均顯著下降。病毒主要有與 “La France disease” 相關的糙皮側耳球形病毒(oyster mushroom spherical virus, OMSV) [26],感染后不產生明顯癥狀的糙皮側耳病毒Ⅰ(Pleurotus ostreatus virusⅠ, PoVⅠ)[27],感染后在菌絲體和子實體階段均出現(xiàn)明顯表型不正常癥狀的糙皮側耳等軸狀病毒(oyster mushroom isometric virus, OMIV)[28],以及最近在糙皮側耳菌株(Shin-Nong )上發(fā)現(xiàn)的糙皮側耳病毒SN(Pleurotus ostreatus virus SN, PoV-SN)病毒[29]。以上4種病毒顆粒形狀均為等軸球狀,除OMSV為+ssRNA病毒外,其它3種為dsRNA病毒,目前已測得了OMSV和PoVⅠ的全長基因組序列,以及PoV-SN的部分基因組序列。危害刺芹側耳的病毒為刺芹側耳球形病毒(Pleurotus eryngii Spherical Virus, PeSV),是+ssRNA病毒,基因組全長為7.8 kbp[30],病害癥狀表現(xiàn)為菌絲體退化、菌柄短而粗、菌蓋平而具不規(guī)則形狀,產量下降等。
1.4ζ淥食用菌病毒病害
除了上述食用菌病毒病害外,在茯苓、銀耳、草菇和金針菇中也發(fā)現(xiàn)了病毒病害[31,32]。草菇中的病毒主要是直徑23 nm的等軸對稱粒體,基因組為dsRNA [31]。金針菇中的病毒(Flammulina velutipes virus, FVV)為直徑50 nm的等軸對稱粒體,基因組為dsRNA,分成兩個片段,大小分別為1.8 kbp和1.9 kbp。FVV與金針菇子實體褐變、質量和產量下降相關 [32]。
2 食用菌病毒病檢測技術
食用菌病毒病害的研究起步較晚[2],傳統(tǒng)的檢測手段主要是電子顯微鏡觀察和dsRNA技術。電子顯微鏡觀察病毒粒子形態(tài)是最為可靠的一種方法,但受病毒粒子提純困難的限制;dsRNA技術是用于檢測食用菌病毒最為普遍的手段,已分離純化的食用菌病毒中除MBV、OMSV和PeSV的基因組為+ssRNA外,其余的均為dsRNA病毒,且多分體現(xiàn)象比較普遍。
近年來,隨著食用菌病毒的不斷發(fā)現(xiàn)和研究的深入,血清學及分子生物學等快速檢測技術也相繼應用于食用菌病毒的檢測上。目前,以提純的病毒粒子為抗原, 制備出了OMIV、OMSV和PeSV的抗血清,并建立了這三種病毒的三抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(triple-antibody sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay, TAS-ELISA)快速檢測方法[28, 30, 33]?；谝呀?jīng)獲得的部分食用菌病毒基因組序列,反轉錄聚合酶鏈式反應(reverse trans criptase polymerase chain reaction, RT-PCR)已成功應用于食用菌菌種、栽培基質、覆土及子實體中LIV、MBV、MVX、OMSV、POVⅠ、PoV-SN等病毒的快速檢測上[13, 18, 27, 29, 34, 35]。最近,Kim 等利用原核表達技術,以重組的OMSV RdRp為抗原制備了單克隆抗體,并建立了OMSV的蛋白質微列陣快速檢測技術[33]; Kim 等還建立了OMSV的表面等離子激元共振(surface plasmon resonance, SPR)生物傳感器快速檢測技術,這兩項檢測技術無論是檢測的靈敏度還是速度都比TAS-ELISA和RT-PCR方法更加先進[36]。另外,核酸分子雜交也已廣泛應用于病毒的檢測[11, 27, 29]。
3 食用菌病毒病害防治
目前,食用菌病毒侵入寄主后如何復制、調控以及對寄主的作用機制尚不清楚,因此,在短時期內選育出抗病毒菌株,或研制出高效的化學或生物農藥來防治病毒病比較困難。食用菌病毒是真菌病毒的一部分,主要通過正常和患病菌絲之間的胞質融合傳播(水平傳播),以及患病菌絲或孢子傳播(垂直傳播)。建立快速靈敏的病毒檢測技術,在感病菌株的潛隱階段、或在感病孢子彈射之前及早發(fā)現(xiàn)病毒,及時清理,是控制食用菌病毒病危害的一種較為有效的方法。此外,食用菌栽培中采取嚴格的清潔措施,使用無病毒材料也是食用菌病毒病害有效的防治措施,可嘗試通過菌絲尖端分離、原生質體再生等方式獲得無病毒材料。
4 存在的問題及展望
與其它作物病毒病的研究相比較,食用菌病毒病害的研究范圍較窄、研究起步較晚、研究基礎較薄弱。目前僅研究了少數(shù)幾種栽培食用菌的病毒病害,對極個別病害,如“La France disease”研究的較多、研究范圍較廣,而對其它病毒病的研究多停留在病毒的發(fā)現(xiàn)及檢測上,且檢測技術還有待進一步改進。在食用菌病毒病害的研究中,除通過柯赫氏法則全過程驗證了雙孢蘑菇部分病毒與寄主之間的侵染關系外[2],其它食用菌病毒或VLPs與寄主之間并沒有結論性的侵染證據(jù),這些病原或疑似病原的起源、如何侵入寄主、在寄主中如何復制、調控及其對寄主的作用機制可以說是知之甚少。
我國食用菌栽培過程中經(jīng)常會出現(xiàn)菌種退化、質量和產量降低等問題,其原因之一可能是病毒病害引起的;國內一些栽培區(qū)也發(fā)現(xiàn)了食用菌病毒病害[20~23],但食用菌病毒病害的危害情況、病原種類等并不是很清楚。因此,建議今后加強對食用菌病毒病害的基礎性調查工作,在調查鑒定病毒種類的基礎上,研究病毒生物學及理化特性,并借助分子生物學技術及其它高新技術分析病毒或VLPs的基因組結構和功能,為揭示病毒與寄主之間的互作關系提供理論依據(jù)。同時在已知病毒基因組序列的基礎上改進病毒檢測方法,以降低由病毒危害造成的經(jīng)濟損失。此外,廣泛應用生物學技術和生物物理等方法,開展食用菌脫毒方面的研究也是今后的研究方向。
參考文獻：略
摘要:概述了食用菌病毒病的種類、危害特征、檢測技術及防治措施等方面的研究現(xiàn)狀,提出了食用菌病毒病研究中存在的問題,并展望了食用菌病毒病研究的發(fā)展趨勢。
關鍵詞:食用菌;A病毒病;A檢測;A防治
S646A
病毒病是食用菌生產中較重要的一類病害。病毒病害與細菌、真菌、線蟲病害危害不同,其發(fā)病癥狀具有潛隱特性,直到生產中的某個時期才開始顯癥,因此是危害食用菌生產較為嚴重的一類病害。隨著研究技術的不斷進步,研究水平的不斷提高,已在雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)、香菇(Lentinula edodes)、糙皮側耳(Pleurotus ostreatus)、刺芹側耳(Pleurotus eryngii)、草菇(Volvariella volvacea)、茯苓(Wolfiporia cocos)、銀耳(Tremella fuciformis)和金針菇(Flammulina velutipes)等食用菌中檢測到病毒或類似病毒顆粒(Virus Like Particles,VLPs),并獲得了部分食用菌病毒或VLPs的基因組序列[1~36] 。
1 食用菌病毒病及其危害
1.1λ孢蘑菇病毒病
1950年,美國賓夕法尼亞州La France兄弟在雙孢蘑菇菇房中發(fā)現(xiàn)了“La France disease”,后稱為“Die-back disease”,這是最早報道的食用菌病毒病害,發(fā)病雙孢蘑菇菌柄細長、菌蓋薄、生長停滯、產量顯著下降[1, 37]。隨后,英國、荷蘭等國家相繼發(fā)現(xiàn)了該病害,發(fā)病癥狀雖因栽培地區(qū)、栽培條件、病毒侵染時期不同而有所不同,但總體表現(xiàn)為子實體畸形、變色和產量顯著下降[2, 3]。目前,“La France disease”在全世界范圍內均有發(fā)生,給雙孢蘑菇生產造成了嚴重的影響[4]。“La France disease”的病原很復雜,在不同感病雙孢蘑菇中曾檢測到至少6種病毒或VLPs,而其作用機制目前仍不是很清楚,但可以肯定,其中至少有一種病毒及其dsRNA(Double-stranded RNAs)與癥狀有明顯的相關性[5~7]。通常認為,與典型的“La France Disease”相關的病毒是34~36 nm的等軸狀病毒顆粒(La France Isometric Virus, LIV)。LIV的 dsRNA至少有6條,最多時可以檢測到9條,按片段長度大小可分為大(L1: 3.6 kbp; L2: 3.0 kbp; L3: 2.8 kbp; L4: 2.7 kbp; L5: 2.5 kbp)、中(M1: 1.6 kbp; M2: 1.4 kbp)和小(S1: 0.9 kbp; S2: 0.8 kbp)三類,其中M1、S1和S2在感病雙孢蘑菇中很少檢測到。目前,已測定了L1、L3、M1、M2的全長基因組序列和L5的大部分基因組序列,5個序列中只有L1由核苷酸推測的氨基酸序列與數(shù)據(jù)庫中依賴于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp)序列相似[7~11]。該等軸狀病毒顆粒(至少6條dsRNA)可以通過菌絲接合或感病孢子傳播傳染[2, 3, 5, 6]。在感病雙孢蘑菇中發(fā)現(xiàn)的另一種與“La France Disease”相關的病毒是19×50 nm的細菌狀病毒顆粒(Mushroom Bacilliform Virus, MBV)。MBV是+ssRNA(single stranded RNA)單分體基因組病毒,是Barnaviridae科中Barnavirus屬的唯一成員。目前已獲得其全長基因組序列,長度為4 kbp,包括4個開放閱讀框架(open reading frames, ORFs),分別編碼20 KDa、73 KDa、47 KDa和22 KDa的多肽。序列分析表明,其ORFs組成和由核苷酸序列推測的氨基酸序列與黃癥病毒組( Luteoviruses)的亞組Ⅱ和南方菜豆花病毒組(Sobemoviruses)相似[12]。Revill等也分析了MBV基因組結構特征及其表達機制[13, 14]。
1996年,在英國發(fā)現(xiàn)了雙孢蘑菇的另一種病害“patch disease”,其發(fā)病癥狀表現(xiàn)為產生無菇區(qū)、出菇期推遲、白色品種子實體褐變、提前開傘、子實體畸形等中的一種或幾種,導致雙孢蘑菇質量和產量下降。Gaze等發(fā)現(xiàn)了與“patch disease”相關的一些新的dsRNA,推測其可能是一種新的病毒,并將此病毒命名為Mushroom virus X(MVX)[15, 16]?，F(xiàn)在,“patch disease”在歐洲一些國家均有發(fā)生[18]。MVX dsRNAs多達26條(0.64 kbp ~ 20.2 kbp),有23條dsRNAs與癥狀相關,其中4條小的dsRNAs(2.0 kbp,1.48 kbp,0.8 kbp,0.6 kbp)與菌蓋褐變有關,另有3條dsRNAs(16.2kbp,9.4 kbp,2.4 kbp)在健康的樣品中也能檢測到。目前,已測定了部分dsRNAs的基因組序列。dsRNAs的種類及濃度或豐度因樣品不同變化很大。根據(jù)MVX dsRNA的數(shù)量、大小和圖譜分析,認為MVX可能是多種病毒的復合體。此外,在投射電鏡下沒有發(fā)現(xiàn)這些dsRNAs有外殼蛋白包被[17, 18]。
1.2ο愎講《靜
香菇帶毒是香菇栽培中的常見問題,香菇感染病毒后的癥狀主要表現(xiàn)為菌絲生長緩慢、長勢減弱、子實體畸形、質量和產量降低等[19~23]。國內外的研究人員先后從生長不正常的香菇子實體和菌絲體中分離到了包括球狀、桿狀和蝌蚪狀(噬菌體)的病毒顆?；騐LPs[19, 22, 23]。日本的Ushiyama(1977)在生長不正常的香菇子實體中檢測到直徑分別為25 nm、30 nm和39 nm(主要類型)的球狀病毒顆粒,以及長度可達1500 nm易彎曲的長線狀和大小為280~300 nm×25~28 nm 的桿狀VLPs[19]。我國的沈學仁等(1992)從生長不正常的香菇菌絲體中也分離到一種直徑為34 nm、CP分子量為22 kDa、基因組為+ssRNA的球狀病毒顆粒,電鏡下觀察發(fā)現(xiàn),病毒顆粒表面光滑無外膜,常呈晶格排列[22]。梁振普等(2005)在香菇中發(fā)現(xiàn)了直徑約為30 nm的球狀病毒和頭部直徑約為40 nm的噬菌體兩種病毒顆粒[23]。
1.3Σ嘍病毒病
我國的學者(1990)在美味側耳(P. sapidus)、糙皮側耳、漏斗狀側耳(P. sojor-caju)、佛羅里達側耳(P.florida)等側耳屬食用菌中發(fā)現(xiàn)病毒病害[24, 25]。美味側耳中的病毒顆粒可分為球狀(φ19、φ25、φ32 nm)和桿狀(40~600 nm× 12~14 nm)兩種,基因組主要由4條dsRNA組成;糙皮側耳、漏斗狀側耳和佛羅里達側耳中的病毒粒子為等軸對稱病毒,直徑在23 nm左右[24]。通過對感染病毒的糙皮側耳子實體進行超微結構分析發(fā)現(xiàn),病毒主要分布于子實體層和柄細胞的細胞質或泡囊內,在細胞間的分布不均勻,且能通過隔膜孔器進行細胞間易位[25]。
韓國近幾年也相繼報道了糙皮側耳[26~29]和刺芹側耳病毒病害[30]。糙皮側耳病毒病害癥狀因病原不同而表現(xiàn)為子實體畸形或不顯癥,但產量均顯著下降。病毒主要有與 “La France disease” 相關的糙皮側耳球形病毒(oyster mushroom spherical virus, OMSV) [26],感染后不產生明顯癥狀的糙皮側耳病毒Ⅰ(Pleurotus ostreatus virusⅠ, PoVⅠ)[27],感染后在菌絲體和子實體階段均出現(xiàn)明顯表型不正常癥狀的糙皮側耳等軸狀病毒(oyster mushroom isometric virus, OMIV)[28],以及最近在糙皮側耳菌株(Shin-Nong )上發(fā)現(xiàn)的糙皮側耳病毒SN(Pleurotus ostreatus virus SN, PoV-SN)病毒[29]。以上4種病毒顆粒形狀均為等軸球狀,除OMSV為+ssRNA病毒外,其它3種為dsRNA病毒,目前已測得了OMSV和PoVⅠ的全長基因組序列,以及PoV-SN的部分基因組序列。危害刺芹側耳的病毒為刺芹側耳球形病毒(Pleurotus eryngii Spherical Virus, PeSV),是+ssRNA病毒,基因組全長為7.8 kbp[30],病害癥狀表現(xiàn)為菌絲體退化、菌柄短而粗、菌蓋平而具不規(guī)則形狀,產量下降等。
1.4ζ淥食用菌病毒病害
除了上述食用菌病毒病害外,在茯苓、銀耳、草菇和金針菇中也發(fā)現(xiàn)了病毒病害[31,32]。草菇中的病毒主要是直徑23 nm的等軸對稱粒體,基因組為dsRNA [31]。金針菇中的病毒(Flammulina velutipes virus, FVV)為直徑50 nm的等軸對稱粒體,基因組為dsRNA,分成兩個片段,大小分別為1.8 kbp和1.9 kbp。FVV與金針菇子實體褐變、質量和產量下降相關 [32]。
2 食用菌病毒病檢測技術
食用菌病毒病害的研究起步較晚[2],傳統(tǒng)的檢測手段主要是電子顯微鏡觀察和dsRNA技術。電子顯微鏡觀察病毒粒子形態(tài)是最為可靠的一種方法,但受病毒粒子提純困難的限制;dsRNA技術是用于檢測食用菌病毒最為普遍的手段,已分離純化的食用菌病毒中除MBV、OMSV和PeSV的基因組為+ssRNA外,其余的均為dsRNA病毒,且多分體現(xiàn)象比較普遍。
近年來,隨著食用菌病毒的不斷發(fā)現(xiàn)和研究的深入,血清學及分子生物學等快速檢測技術也相繼應用于食用菌病毒的檢測上。目前,以提純的病毒粒子為抗原, 制備出了OMIV、OMSV和PeSV的抗血清,并建立了這三種病毒的三抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(triple-antibody sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay, TAS-ELISA)快速檢測方法[28, 30, 33]?；谝呀?jīng)獲得的部分食用菌病毒基因組序列,反轉錄聚合酶鏈式反應(reverse trans criptase polymerase chain reaction, RT-PCR)已成功應用于食用菌菌種、栽培基質、覆土及子實體中LIV、MBV、MVX、OMSV、POVⅠ、PoV-SN等病毒的快速檢測上[13, 18, 27, 29, 34, 35]。最近,Kim 等利用原核表達技術,以重組的OMSV RdRp為抗原制備了單克隆抗體,并建立了OMSV的蛋白質微列陣快速檢測技術[33]; Kim 等還建立了OMSV的表面等離子激元共振(surface plasmon resonance, SPR)生物傳感器快速檢測技術,這兩項檢測技術無論是檢測的靈敏度還是速度都比TAS-ELISA和RT-PCR方法更加先進[36]。另外,核酸分子雜交也已廣泛應用于病毒的檢測[11, 27, 29]。
3 食用菌病毒病害防治
目前,食用菌病毒侵入寄主后如何復制、調控以及對寄主的作用機制尚不清楚,因此,在短時期內選育出抗病毒菌株,或研制出高效的化學或生物農藥來防治病毒病比較困難。食用菌病毒是真菌病毒的一部分,主要通過正常和患病菌絲之間的胞質融合傳播(水平傳播),以及患病菌絲或孢子傳播(垂直傳播)。建立快速靈敏的病毒檢測技術,在感病菌株的潛隱階段、或在感病孢子彈射之前及早發(fā)現(xiàn)病毒,及時清理,是控制食用菌病毒病危害的一種較為有效的方法。此外,食用菌栽培中采取嚴格的清潔措施,使用無病毒材料也是食用菌病毒病害有效的防治措施,可嘗試通過菌絲尖端分離、原生質體再生等方式獲得無病毒材料。
4 存在的問題及展望
與其它作物病毒病的研究相比較,食用菌病毒病害的研究范圍較窄、研究起步較晚、研究基礎較薄弱。目前僅研究了少數(shù)幾種栽培食用菌的病毒病害,對極個別病害,如“La France disease”研究的較多、研究范圍較廣,而對其它病毒病的研究多停留在病毒的發(fā)現(xiàn)及檢測上,且檢測技術還有待進一步改進。在食用菌病毒病害的研究中,除通過柯赫氏法則全過程驗證了雙孢蘑菇部分病毒與寄主之間的侵染關系外[2],其它食用菌病毒或VLPs與寄主之間并沒有結論性的侵染證據(jù),這些病原或疑似病原的起源、如何侵入寄主、在寄主中如何復制、調控及其對寄主的作用機制可以說是知之甚少。
我國食用菌栽培過程中經(jīng)常會出現(xiàn)菌種退化、質量和產量降低等問題,其原因之一可能是病毒病害引起的;國內一些栽培區(qū)也發(fā)現(xiàn)了食用菌病毒病害[20~23],但食用菌病毒病害的危害情況、病原種類等并不是很清楚。因此,建議今后加強對食用菌病毒病害的基礎性調查工作,在調查鑒定病毒種類的基礎上,研究病毒生物學及理化特性,并借助分子生物學技術及其它高新技術分析病毒或VLPs的基因組結構和功能,為揭示病毒與寄主之間的互作關系提供理論依據(jù)。同時在已知病毒基因組序列的基礎上改進病毒檢測方法,以降低由病毒危害造成的經(jīng)濟損失。此外,廣泛應用生物學技術和生物物理等方法,開展食用菌脫毒方面的研究也是今后的研究方向。
參考文獻：略
