復方靈芝降糖膠囊對胰島B細胞形態(tài)學的影響

廣州中醫(yī)藥大學學報 2000年第1期第17卷 實驗研究

作者：陳文良　黃萍　吳清和　徐鴻華　榮向路　韓堅

單位：廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣州　510405

關鍵詞：@復方靈芝降糖膠囊/藥理學；靈芝/藥理學；黃芪/藥理學；糖尿病/中藥療法；胰島/藥物作用；疾病模型，動物

　　摘要：為探討廣州中醫(yī)藥大學新藥開發(fā)研究中心研制的復方靈芝降糖膠囊(靈芝、黃芪、三七等中藥組成)治療糖尿病的作用機理，觀察該藥對鏈脲霉素所致糖尿病模型大鼠的胰島B細胞形態(tài)等方面的影響。結(jié)果表明，復方靈芝降糖膠囊可提高實驗性糖尿病大鼠胰島B細胞體密度(P＜0.001)，對受損的胰島B細胞具有修復和再生的作用，這可能是復方靈芝降糖膠囊治療糖尿病的機理之一。

　　中圖分類號：R285.5　文獻標識碼：A

　　文章編號：1007-3213(2000)01-0051-04

Effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on Morphology of Islet B Cell in Rats

CHEN Wenliang

　　(Shenzhen Pharmaceutical Factory of Chinese Materia Medica,Shenzhen 518029,China)

　　HUANG Ping,WU Qinghe,XU Honghua,RONG Xianglu,HAN Jian

　　(Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)

　　Abstract:To explore the mechanism of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule for diabetes mellitus,the effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on morphology of islet B cell in rats with diabetes mellitus was studied.Results showed that Compound Lingzhi Jiangtang Capsule could increase the volume density of islet B cell(P＜0.001) and promote the repair and regeneration of the damaged islet B cell.

　　Key words:@ COMPOUND LINGZHI JIANGTANG CAPSULE/pharmacology;LINGZHI/pharmacology;ASTRAGALUS MEMBRANACEUS/pharmacology;DIABETES MELLITUS/TCD therapy;ISLETS OF LANGERHANS/drug eff.;DISEASE MODELS,ANIMAL

　　由廣州中醫(yī)藥大學新藥開發(fā)研究中心研制的復方靈芝降糖膠囊主要由靈芝、黃芪、三七等藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰、補脾益腎、活血化瘀的功效，主治糖尿病及其合并癥。本研究從藥物對胰島B細胞形態(tài)的影響等方面，探討了復方靈芝降糖膠囊治療糖尿病的作用機理。

　　1　實驗材料

　　1.1　藥物　復方靈芝降糖膠囊，每粒含生藥4.46g，由廣州中醫(yī)藥大學新藥開發(fā)研究中心提供，批號980428。使用時以蒸餾水配制成所需濃度。優(yōu)降糖：天津市力生制藥廠產(chǎn)品，批號9703004。

　　1.2　動物　SD系大鼠(合格證號：97A018)，由廣東省衛(wèi)生廳醫(yī)用動物場提供。

　　1.3　試劑與儀器　鏈脲霉素：進口分裝，美國Sigma公司產(chǎn)品，批號980420。小鼠抗人和動物胰島素血清：進口分裝，武漢博士德生物公司產(chǎn)品，批號SA1021。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)，美國Sigma公司產(chǎn)品，批號DS7028。

　　2　實驗方法與結(jié)果

　　選取健康大鼠32只，雌雄各半。參照文獻［1］方法，用鏈脲霉素給大鼠尾靜脈注射誘導出糖尿病模型，以血糖值c≥10mmol/L的大鼠作為糖尿病模型，隨機分為模型組、優(yōu)降糖組、復方靈芝降糖膠囊低、高劑量組，每組動物各8只，另取未經(jīng)造模的同批大鼠8只作為正常對照組。每天灌胃給藥1次(對照組和模型組給蒸餾水)，第20天灌胃給藥后1h將動物脫頸椎處死，迅速剖腹取其胰尾組織，Bouin液固定，石蠟包埋，制成6μm和4μm厚的連續(xù)切片，分別作HE及胰島B細胞免疫化學染色。

　　2.1　HE染色　HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正常組切片胰島數(shù)目較多，輪廓規(guī)則整齊，胰島內(nèi)細胞排列整齊，胞漿飽滿，細胞界限清楚。模型組切片胰島數(shù)目較少，胰島內(nèi)形態(tài)欠規(guī)則，細胞排列紊亂，常有細胞缺失、塌陷。在400倍鏡下還可更清楚地看到以下形態(tài)：正常組切片胰島內(nèi)充滿藍色的B細胞分泌顆粒，細胞排列緊湊、整齊，分布均勻。模型組切片胰島內(nèi)B細胞有嚴重的脫顆粒現(xiàn)象，少數(shù)細胞塌陷、缺失，排列不規(guī)則。陽性組和復方靈芝降糖膠囊用藥各組均有不同程度的改觀(見圖1)。

1　胰島B細胞HE染色電鏡切片圖

　　A.正常組；B.模型組；C.復方靈芝降糖膠囊高劑量組；D.復方靈芝降糖膠囊低劑量組

　　2.2　胰島B細胞免疫化學染色　胰島B細胞免疫化學染色片鏡下陽性反應物呈棕黃色，正常胰腺為陽性對照，陰性對照以PBS緩沖液代替一抗。然后取各組胰島B細胞免疫化學染色切片，每片隨機取3個胰島視野參考Weibel方格系統(tǒng)計數(shù)法［2］，應用雙方形網(wǎng)格測試板直接在顯微鏡下計數(shù)，求出B細胞體密度。

　　B細胞體密度p=PB/PI×100(PI為落在胰島內(nèi)點數(shù)，PB為落在B細胞內(nèi)點數(shù))。

　　2.2.1　免疫組化染色

　　結(jié)果見圖2。

2　胰島B細胞免疫組化染色電鏡切片圖

　　A.正常組；B.模型組；C.復方靈芝降糖膠囊高劑量組；D.復方靈芝降糖膠囊低劑量組

　　正常組：胰島一般為圓形或長橢圓形，體積大小不一，個別胰島形態(tài)不規(guī)則，有呈半月形、彎曲的圓子柱狀等形態(tài)。B細胞(免疫反應陽性細胞)主要分布于胰島中心部位，排列較規(guī)則，一般呈圓形，大小均勻，胞質(zhì)較多，胞漿中充滿粗大的胰島素染色顆粒，均勻地散布于整個胰島，胞核不著色，但可清楚地觀察到其輪廓，多呈圓形或橢圓形。

　　模型組：染色片中胰島素染色顆粒較少，B細胞松散排列，分布不規(guī)則，有的胞漿中胰島素染色顆粒明顯減少使細胞呈空虛狀態(tài)。

　　優(yōu)降糖和復方靈芝降糖膠囊高劑量組：染色片中胰島B細胞在胰島內(nèi)的分布、細胞形態(tài)、染色顆粒的分布等方面與模型組比較均有不同程度的改觀，胰島B細胞染色顆粒較多，胞質(zhì)飽滿。

　　復方靈芝降糖膠囊低劑量組：染色片中胰島B細胞在胰島內(nèi)的分布、細胞形態(tài)、染色顆粒的分布等方面與模型組比較未發(fā)現(xiàn)明顯的變化。

　　2.2.2　定量分析

　　結(jié)果見表1。

　表1　復方靈芝降糖膠囊對糖尿病模型大鼠胰島

　　B細胞體密度(p)的影響()

組　別 N/只 w/(g?kg-1) p/%

對照組 8 - 68.84±17.49

模型組 8 - 21.13±7.60△△△

優(yōu)降糖組 8 0.005 43.00±15.54**

靈芝降糖低劑組 8 1.84 25.58±10.30

靈芝降糖高劑組 8 7.40 56.40±9.16***

　　△△△與對照組比較P＜0.001；**與模型組比較P＜0.01，***P＜0.001

　　表1顯示，復方靈芝降糖膠囊高劑量組可提高大鼠B細胞體密度(與模型組比較P＜0.001)；低劑量對大鼠B細胞體密度的改善無明顯作用(P＞0.05)，優(yōu)降糖亦可提高大鼠B細胞體密度(與模型組比較P＜0.01)。

　　3　討論

　　糖尿病是一種急性或慢性的代謝障礙性疾病，主要是由于胰島素的絕對或相對缺乏所引起。已有大量事實證明，無論是Ⅰ型糖尿病還是Ⅱ型糖尿病，其發(fā)病均與胰腺內(nèi)分泌細胞功能異常有關。胰內(nèi)分泌腺含有幾十萬個內(nèi)分泌腺體―angerhans氏島(即胰島)，它分散地分布在胰外分泌腺體中。目前的研究已經(jīng)證實，胰島中至少有4種細胞，即A、B、D及F細胞，而且這些細胞的分布、功能又有很大差別。目前所知，與糖尿病關系比較密切的主要是在胰尾部分布較多的A細胞(約占20%)和B細胞(約占75%)，前者分泌的胰高血糖素和后者分泌的胰島素(RI)、C肽等對體內(nèi)的血糖調(diào)節(jié)起著重要的作用。糖尿病的發(fā)生與胰島組織細胞功能障礙，尤其是B細胞的功能不足有很大關系。隨著細胞組織免疫化學染色技術的飛速發(fā)展，在糖尿病機制的研究中有關B細胞形態(tài)學的探討越來越受到人們重視。有學者在電鏡下觀察到，胰腺B細胞中β顆粒是通過“細胞嘔吐”(Cell Vomiting)的方式排出的，圍繞顆粒的膜先與細胞膜融合，然后融合部位裂開，顆粒就從細胞排出，離開細胞進入細胞外間隙，再經(jīng)過毛細血管內(nèi)皮進入血液循環(huán)。B細胞內(nèi)β顆粒的數(shù)量與胰腺的胰島素含量平行，當胰島素分泌后，可看到B細胞脫顆?，F(xiàn)象(顆粒減少)［3］。這樣就從微觀層面上證實了胰島結(jié)構(gòu)與功能的緊密相關性。

　　鏈脲霉素(STZ)對動物胰島B細胞有特異性的殺傷作用，已被廣泛用于制備實驗性糖尿病動物模型。在本實驗中所采用的胰島兩種染色方法結(jié)果顯示，模型組切片與正常組切片比較在形態(tài)學上有很大差異，模型組大鼠的染色片中胰島周圍組織結(jié)構(gòu)紊亂，胰島數(shù)目少，B細胞松散排列，分布不規(guī)則，有的胞漿中胰島素染色顆粒明顯減少使細胞呈空虛狀態(tài)。陽性組和復方靈芝降糖膠囊組的染色片中胰島及胰島B細胞的形態(tài)均有不同程度的改觀。

　　在采用免疫組化方法對其進行B細胞體密度的計量研究中發(fā)現(xiàn)，模型組B細胞體密度與正常比較明顯減少，復方靈芝降糖膠囊對大鼠的B細胞體密度有明顯改善作用。

　　本研究證明復方靈芝降糖膠囊對STZ造成的大鼠胰島B細胞的損傷有一定的治療作用，對保持胰島B細胞的細胞結(jié)構(gòu)完整、維持正常的生理功能有著重要的作用，從而保證了B細胞合成、釋放胰島素各環(huán)節(jié)功能正常，在一定意義上防止了糖尿病的發(fā)生。研究結(jié)果提示，促進受損胰島B細胞的修復和再生是復方靈芝降糖膠囊治療糖尿病的機理之一。

　　基金項目：廣東省重點科技攻關項目(1997-1)

　　作者簡介：陳文良，男，1973年出生，碩士；

　　參考文獻：

　　［1］大西r之，山田俊雄，山田和雄，他.ストレプトゾトシンおょびサイプロヘプタジンによゐ實驗的糖尿病モデルの比較［J］.日本藥理學雜志，1986(87)：105

　　［2］Weibl E R.Sterological Methods.In:Practical methods for biological morphology［M］.London：Academic Press,1979.91

　?。?］楊鋼.內(nèi)分泌生理與病理生理學［M］.天津：天津科學技術出版社，1996