【作者】金凱 張永軍 羅志兵 林健文 裴炎

【機(jī)構(gòu)】西南大學(xué)生物技術(shù)中心農(nóng)業(yè)部生物技術(shù)與作物品質(zhì)改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室西南大學(xué)生物技術(shù)中心農(nóng)業(yè)部生物技術(shù)與作物品質(zhì)改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 重慶400716

【摘要】綠色熒光蛋白(GFP)作為一種重要的報(bào)告基因,在病原菌和寄主之間的互作研究中具有良好的應(yīng)用前景。利用草丁膦抗性基因bar為篩選標(biāo)記,構(gòu)建了組成性表達(dá)綠色熒光蛋白基因egfp的載體pBG,并轉(zhuǎn)入球孢白僵菌獲得成功表達(dá)。將轉(zhuǎn)化子接種菜青蟲進(jìn)行生物測定表明,組成性表達(dá)egfp不影響球孢白僵菌的毒力。進(jìn)一步利用冰凍切片和熒光顯微觀察技術(shù)監(jiān)測球孢白僵菌侵染寄主行為,結(jié)果顯示,通過熒光觀察可清楚的檢測到病原菌在昆蟲體表的附著、菌絲穿透體壁以及菌絲從寄主體內(nèi)長出等侵染過程。由此表明,GFP可有效用于球孢白僵菌的遺傳標(biāo)記,進(jìn)行病原菌的鑒別、侵染致病機(jī)理及相關(guān)功能基因的表達(dá)模式研究。 

【基金】國家自然科學(xué)基金(No.30471174)； 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究計(jì)劃(973)項(xiàng)目(No.2003CB114203)；

【關(guān)鍵詞】昆蟲病原真菌; 轉(zhuǎn)化; 冰凍切片; 熒光檢測;