【作者】姜露熙 王俊杰 李娜 徐軍偉

【機(jī)構(gòu)】昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 昆明理工大學(xué)理學(xué)院

摘要：首先采用熒光定量PCR的方法通過(guò)分析在液體靜置和振蕩培養(yǎng)條件下基因的表達(dá)量對(duì)靈芝(Ganoderma lingzhi)細(xì)胞中14個(gè)與類固醇結(jié)合的P450基因進(jìn)行篩選;其次在不同培養(yǎng)條件下(振蕩、靜置、靜置鈣離子添加和靜置氮缺陷)通過(guò)分析靈芝酸T積累與P450基因表達(dá)的相關(guān)性對(duì)差異表達(dá)顯著的P450基因進(jìn)行進(jìn)一步篩選;最后通過(guò)反義RNA技術(shù)對(duì)所篩選出的基因進(jìn)行沉默,分析在靈芝細(xì)胞內(nèi)沉默該基因?qū)`芝酸T含量的影響。結(jié)果表明:14個(gè)P450基因中,5個(gè)基因(cyp512a3、cyp512a11、cyp5144n1、cyp512u4、cyp512v2)的表達(dá)量在靜置培養(yǎng)條件下顯著高于振蕩培養(yǎng)條件,差異表達(dá)倍數(shù)分別為7.2、3.7、3.4、89.8、63.4;cyp512v2基因的表達(dá)與靈芝酸T的積累顯著相關(guān);三株cyp512v2基因沉默效率較高的菌株中靈芝酸T含量分別比野生型菌株的含量降低13%、69%、66%,表明cyp512v2在靈芝酸T的生物合成過(guò)程中具有重要的作用。 

基金：國(guó)家自然科學(xué)基金(21566016和31360495)；

關(guān)鍵詞：靈芝; 靈芝酸; 甲羥戊酸途徑; 細(xì)胞色素P450; 反義RNA技術(shù);